G-25重力法脱盐柱装填以葡聚糖为基质的凝胶过滤层析介质，通过葡聚糖中网状结构的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同而实现分离。 层析时，大于凝胶孔径的分子被阻于凝胶相外，沿凝胶颗粒之间的间隙行进，迁移速度最快，故ZX洗脱下来。中等大小的分子部分地进入凝胶相内部，洗脱速度次之；而小分子物质因全部进入凝胶，受到的阻力ZD，故ZH被洗脱下来。不同大小的分子由此得到分离，以便用于PCR、测序和分子克隆等下游应用。